龍膽瀉肝湯免疫機轉研究（2-2）

黃慧貞
國立台灣大
「龍膽瀉肝湯免疫機研究」計畫第一年已有初步結果，我們培養淋巴細胞及肝臟組織細胞，給予發炎性細胞激素，TNF-a ，導致細胞凋亡(apoptosis)，甚至壞死(necrosis)，造成細胞損傷或纖維化。我們已建立此發炎免疫機轉模式來研究龍膽瀉肝湯方劑及其組成中消炎有效之藥材及活性成分對此發炎免疫機轉是否有對抗保護作用。龍膽瀉肝湯出典於局方。組成是龍膽草（酒炒）、黃芩（炒）、梔子（酒炒）、澤瀉、木通、車前子、當歸（酒洗）、生地黃（酒炒）、柴胡、甘草（生用）。此中藥複方在中醫臨床上應用於肝炎之抗發炎療效很好，也有報告用於其他炎症。在慢性肝炎(chronic active hepatitis)或自體免疫引起之肝病(autoimmune liver disease)，T淋巴細胞(T lymphocyte)活化聚集造成肝臟損傷。已有報告指出肝炎病人及肝炎動物模式之發炎性細胞激素cytokines，如：TNF (tumor necrosis factor), IFN gamma (interferon gamma)等，血中濃度會增加。其作用機轉可能導致肝臟細胞凋亡(apoptosis)，進而甚至壞死(necrosis)，造成肝臟損傷或組織纖維化(Tiegs, 1997)。在我們已建立之發炎免疫機轉模式，TNF會導引細胞凋亡及增加組織纖維化相關之TGF-b 基因表現。龍膽瀉肝湯複方及其組成藥材成分，龍膽草成分gentiopicroside，黃芩成分baicalein，梔子成分geniposide，澤瀉成分alisol及柴胡成分saikosaponin對於TNF作用都能對抗保護。第二年我們將進一步探討複方及有效成分之作用機轉，是否影響細胞生長及凋亡相關之訊息傳遞及基因表現。在這些研究中，我們將分別測定藥物處理前、處理後之細胞之protein kinase C活性、protein tyrosine kinase活性、ERK (extracellular signal-regulated kinase)活性及JNK (c-jun N-terminal kinase) 活性。我們也將測定一些early genes、growth factors及與細胞生長死亡相關之其他基因之基因表現，如：platelet derived growth factor, transforming growth factor, c-fos, c-jun, c-myc, 及 bcl-2, p53。我們將利用實驗室為研究酚類成分已建立之現有技術，也將再建立新技術，如：TUNEL staining for cell apoptosis, immunoprecipitation and immunoblotting for ERK or JNK activity及phosphorylation shift technique for protein kinases。一方面可以了解龍膽瀉肝湯及其藥效成分之藥理作用機轉。一方面可以利用此發炎免疫機轉模式來篩選其他可能有效之中藥材。同時，心臟血管疾病中動脈粥狀硬化(atherosclerosis)及血管成形術後再阻塞(post-anpioplasty restenosis)之主要病變之一是淋巴細胞活化聚集、血管平滑肌細胞增生及細胞外基質增多。因此，對此發炎性細胞激素之發炎免疫機轉有保護作用之中藥材成分除了用在各種炎症，也可能對動脈粥狀硬化及血管成形術後再阻塞等心臟血管疾病具有療效(Huang et al., 1992c)。可能擴展有效之中藥材及其藥效成分應用於心臟血管疾病。本研究計畫，第一年已建立檢定系統，初步研究龍膽瀉肝湯方劑之作用及篩選其組成藥材之活性成分。已有初步結果之複方及活性成分先探討作用機轉，一方面繼續篩選其他有效成分。第二年主要將探討複方及各有效成分之詳細作用機轉。將能進一步了解清瀉肝火成分、利水滲溼成分、疏泄肝火成分在免疫機轉上扮演之角色。
關鍵字：龍膽瀉肝湯、消炎作用anti-inflamatory effects、淋巴細胞lymphocyte、細胞激素cytokines、細胞凋亡apoptosis、訊息傳遞路徑signal transduction pathway、基因表現gene expression。

Study on the immunological mechanisms of therapeutic effect of Long-dan-tan （2-2）

Huang, Huei-Chen
College of Medicine, National Taiwan University

In the first year of this project, we had the prelimary results of the immunological mechanisms of crude Long-dan-tan (龍膽瀉肝湯) and its active components. CEM lymphocyte and HepG2 cell line were cultured and TNF-a was added to induce cell apoptosis or necrosis. This assay system was setup to investigate the protective effects of crude Long-dan-tan (龍膽瀉肝湯) and its active components on the effect of cytokine. Long-dan-tan (龍膽瀉肝湯) is one of Chinese medicinal prescriptions on 局方. The components of Long-dan-tan are龍膽草（酒炒）, 黃芩（炒）, 梔子（酒炒）, 澤瀉, 木通, 車前子, 當歸（酒洗）, 生地黃（酒炒）, 柴胡, 甘草（生用）. This Chinese medicinal prescription is reported to have the anti-inflammatory activities to some inflammatory diseases, including hepatitis. In chronic active hepatitis or autoimmune liver disease, the activation and accumulation of T lymphocytes are found to be responsible for liver damage. Some reports have demonstrated that the plasma levels of in
關鍵字：Long-dan-tan, anti-inflamatory effects, lymphocytes, cytokines, cell apoptosis, signal transduction pathway, gene expression。