以PCR擴增粒腺體DNA之限制圖譜作為保育類動物中之中藥材羚羊角之基原鑑定
邱進益
行政院衛生
依統計被列入瀕臨絕種及稀有品種的羚羊類最少有22種之多，華盛頓公約組織(CITES)已將這些種類的羚羊列入保育類動物，雖然我們目前仍然不屬於CITES會員國，但是配合政府行政部門國際化的腳步，羚羊角從中藥中剔除將是衛生主管機關未來極力要推動的政策之一。因此對於這些中藥用羚羊角建立一套可靠的鑑別方法當是刻不容緩的事，消極上除了未來在查緝上更有依據外，積極上更能精確鑑別不同品係羚羊角基原，對於以後杜絕輸入來源亦更能掌握。此外，不同基原之羚羊角可能存在有不同的藥效，基原的鑑定不但有助於羚羊角的篩選，促使中藥用之科學化，對於選擇羚羊角之替代藥品亦將有莫大的助益。以DNA為基礎之鑑別如：限制片段的分析(RFLP)和DNA的指紋分析已成功的應用在人類法醫學的鑑定上，然而這項技術應用在野生動物的基原鑑定的例子尚不很多。以DNA作為基原的鑑別首先必須選擇一遺傳標的物(genetic marker)，此標的物必須在不同種間顯現足夠的差異性，相同種間則又具有均一之相似性，以便能夠區分不同的種源（或基原）。粒腺體DNA(mitochondrial DNA)已被證實具有上述所要求的特性。由於粒腺體D-環(D-loop) 區具有快速鹼基取代的特質，依統計每年每一基位的取代率約為4.7Ⅹ10-8，因此在不同種之間其DNA順序變異頗大，這種變異可藉由辨認不同鹼基位之限制酵素來偵測。本研究主要的目的在利用粒腺體DNA之變異作為野生動物羚羊角基原的鑑定，初期將選用台灣中藥常用之大鼻羚(Saiga tatarica)之羚羊角作為研究對象，以羚羊角角質細胞之粒腺體DNA 作為鑑別之依據。磨粉後之羚羊角及混合在中藥中之羚羊角粉末，經PCR擴增後之DNA將施以限制酵素切割，所得的DNA片段除了以acrylamide gel電泳分析外，並將以毛細管電泳分析作更一步的限制圖譜比對。此外，PCR產物將作DNA定序分析，這種方法不但能應用在研磨成粉末的羚羊角之鑑別，即使與其他中藥混合亦能精確的鑑別和區分羚羊角的基原。此外，這些資料不但能精確的將結果數據化外，更能建立基原基因庫和限制圖譜及毛細管電泳圖譜之資訊。
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Forensic Identification of Antelope Horns Using Restriction Site Patterns of PCR Amplified Mitochondrial DNA
The difficulty in examinatin of the wildlife antelope horn used in Chinese medicines is that medicine preparations are generally in combination mixture. Therefore, to establish a precise method for forensic identification of antelope species as well as for the antelope horn ingredient in Chinese medicine is in necessity. The development of molecular techniquees such as restriction fragment analysis (i.e., RFLPs), DNA fingerprinting have revolutionized the field of human forensic science. However, in wildlife forensic investigations these techniques are just beginning to be used. The choice of a genetic marker is the first step for forensic identification using DNA based techniques. For species identification the marker should display enough variation among species so that each species has a unique set of variants yet homogeneous enough within a species so that a variant can be correctly assigned to a species. Mitochondrial DNA (mtDNA) is known to possess these characteristics. The D-lo
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