川芎的活性生物鹼, tetramethylpyrazine抑制血小板凝即與活化ecNO synthase蛋白表現的研究
許準榕副教授
私立台北醫
Tetramethylpyrazine (TMP) 是由中藥川芎所萃取出的活性生物鹼；之前我們已研究過TMP 的抗人類血小板凝集作用的活性，發現TMP在高濃度下 (0.5-1.5 mM) 隨著濃度的增加而有效的抑制各種活化劑 (如ADP, collagen及U46619) 所引起的血小板凝集反應及 ATP的釋放反應；在此濃度下的TMP 並不會影響到血小板細胞膜的流動性和滲透性；進一步研究其作用機轉顯示，TMP在此濃度下會明顯的抑制血小板細胞內的 thromboxane A2 之合成及phosphoinositide 的分解，同時亦會干擾fibrinogen 和細胞膜上的glycoprotein IIb/IIIa受體的結合作用。
另一方面，我們發現TMP 在較低濃度 (50 mM)下，會促進血小板增加 nitric oxide (NO) 的合成；因血小板不具有細胞核，因此它只含有固定型的NO合成 enzyme (cNO synthase)。 進一步研究亦證實TMP在10-50 mM濃度下，確實會隨著濃度的增加而刺激 NO的釋放；這些初步的研究結果令我們非常欣喜。因為至目前為止，學術界尚未有任何有關天然化合物具有刺激及誘導cNO 表現的文獻報導。因此本計畫欲進一步研究TMP 如何活化cNOS 的作用機轉；如研究 (1) TMP活化NO合成的濃度和時間的相關性；(2) TMP對細胞內NO 和 cyclic GMP 及鈣離子的作用關係；(3) 利用Western blot及immunoprecipitation 的方法研究TMP 促使NO 的合成是否經由刺激cNOS 的蛋白表現而來；(4) 利用PCR 技術，進一步探討 TMP是否會增加cNOS 之mRNA 的表現。相信透過本計畫的實施，將可發現一全新的天然cNOS 活化劑。
關鍵字：川芎，Tetramethylpyrazine，血小板，cNOS活化劑
Tetramethylpyrazine, a naturally occurring ecNO synthase activator in human platelets
Joen-Rong Sheu
Taipei Medical College
Tetramethylpyrazine (TMP) is an active alkaloid purified from a Chinese herbal medicine ”Chung Chong”. TMP was tested for its antiplatelet activities in human platelets. TMP (0.5-1.5 mM) dose-dependently inhibited both platelet aggregation and ATP-release reaction induced by a variety of agonists (i.e, ADP, collagen, and U46619). TMP did not significantly change the membrane fluidity and permeabilization of human platelets. Furthermore, TMP (0.5-1.5 mM) inhibited thromboxane A2 and phosphoinositide breakdown stimulated by collagen. In addition, TMP has also been shown to interfere the binding of fibrinogen with the glycoprotein IIb/IIIa complex. On the other hand, we also found that TMP (10-50 mM) dose-dependently increased nitric oxide (NO) formation by the chemiluminescence technique. Therefore, we intend to further investigate the detailed mechanism of TMP at increasing of No formation in this project. Several studies will be performed in this project as following: (1) TMP dose
關鍵字：Chung Chong, tetramethylpyrazine, platelets, ecNOS activator
