龍膽瀉肝湯免疫機轉研究

黃慧貞教授
臺大醫學院
龍膽瀉肝湯出典於局方。組成是龍膽草（酒炒）、黃芩（炒）、梔子（酒炒）、澤瀉、木通、車前子、當歸（酒洗）、生地黃（酒炒）、柴胡、甘草（生用）。此中藥複方。在中醫臨床上應用於肝炎之抗發炎療效很好，也有報告用於其他炎症。在慢性肝炎(chronic active hepatitis)或自體免疫引起之肝病(autoimmune liver disease)，T淋巴細胞(T lymphocyte)活化聚集造成肝臟損傷。已有報告指出肝炎病人及肝炎動物模式之發炎性細胞激素cytokines，如：TNF (tumor necrosis factor), IFN gamma (interferon gamma)等，血中濃度會增加。其作用機轉可能導致肝臟細胞凋亡(apoptosis)，進而甚至壞死(necrosis)，造成肝臟損傷或組織纖維化(Tiegs, 1997)。本研究計畫，我們將建立此發炎免疫機轉模式來研究龍膽瀉肝湯方劑及其藥效成分對此發炎免疫機轉是否有對抗保護作用。我們曾報告黃芩之酚類活性成分baicalein (5,6,7-trihydroxyflavone)能抑制淋巴細胞增生，主要經由減少細胞生長相關之訊息傳遞及基因表現(Huang et al., 1994a)。黃芩是龍膽瀉肝湯中之組成藥材之一。最近我們初步實驗發現植物酚類成分也能對抗TNF對細胞的作用。本研究計畫，我們將培養淋巴細胞及肝臟細胞，給予發炎性細胞激素，TNF，研究龍膽瀉肝湯方劑及其組成中抗炎有效之藥材及活性成分。TNF會導引細胞凋亡，我們將進一步探討有效成分之作用機轉，是否影響細胞生長及凋亡相關之訊息傳遞及基因表現。在這些研究中，我們將分別測定藥物處理前、處理後之細胞之protein kinase C活性、protein tyrosine kinase活性、ERK (extracellular signal-regulated kinase)活性及JNK (c-jun N-terminal kinase) 活性。我們也將測定一些early genes、growth factors及與細胞生長死亡相關之其他基因之基因表現，如：platelet derived growth factor, transforming growth factor, c-fos, c-jun, c-myc, 及 bcl-2, p53。我們將利用實驗室為研究酚類成分已建立之現有技術，也將再建立新技術，如：TUNEL staining for cell apoptosis, immunoprecipitation and immunoblotting for ERK or JNK activity及phosphorylation shift technique for protein kinases。一方面可以了解龍膽瀉肝湯及其藥效成分之藥理作用機轉。一方面可以利用此發炎免疫機轉模式來篩選其他有效之中藥材。同時，心臟血管疾病中動脈粥狀硬化(atherosclerosis)及血管成形術後再阻塞(post-anpioplasty restenosis)之主要病變之一是淋巴細胞活化聚集、血管平滑肌細胞增生及細胞外基質增多。因此，對此發炎免疫機轉有保護作用之中藥材成分除了用在各種炎症，也可能對動脈粥狀硬化及血管成形術後再阻塞等心臟血管疾病具有療效(Huang et al., 1992c)。可能擴展有效之中藥材及其藥效成分應用於心臟血管疾病。本研究計畫，第一年主要將建立檢定系統，初步研究龍膽瀉肝湯方劑本身及其組成中抗炎有效之藥材；分離中藥材成分，篩選有效成分。同時，第一年由已有初步結果之複方及活性成分先探討作用機轉，一方面繼續篩選其他有效成分。第二年第三年主要將探討複方及各有效成分之作用機轉。
關鍵字：龍膽瀉肝湯、消炎作用、淋巴細胞、細胞激素、細胞凋亡、訊息傳遞路徑、基因表現

Study on the immunological mechanisms of therapeutic effect of Long-dan-tan

Huang, Huei-Chen
National Taiwan University, Department of Pharmacology
Long-dan-tan (龍膽瀉肝湯) is one of Chinese medicinal prescriptions on 局方. The components of Long-dan-tan are龍膽草（酒炒）, 黃芩（炒）, 梔子（酒炒）, 澤瀉, 木通, 車前子, 當歸（酒洗）, 生地黃（酒炒）, 柴胡, 甘草（生用）. This Chinese medicinal prescription is reported to have the anti-inflammatory activities to some inflammatory diseases, including hepatitis. In chronic active hepatitis or autoimmune liver disease, the activation and accumulation of T lymphocytes are found to be responsible for liver damage. Some reports have demonstrated that the plasma levels of inflammatory cytokines, such as TNF (tumor necrosis factor), IFN gamma (interferon gamma), increase in hepatitis patients and animal models. The action mechanisms of inflammatory cytokines may be mediated through the induction of apoptosis or necrosis in hepatocytes, and then liver damage or fibrosis (Tiegs, 1997). In this project, we will set up an inflammatory models to study the protective effects of Long-dan-tan and its
關鍵字：Long-dan-tan, anti-inflamatory effects, lymphocytes, cytokines, cell　apoptosis, signal transduction pathway, gene expression.